Наталья Витальевна Минеева, д. б. н., профессор, руководитель лаборатории
научно-исследовательская лаборатория иммуногематологии и геномики групп крови
191024
2-я Советская ул., д. 16
Санкт-Петербург
Natalia V. Mineeva, Dr. Sci. (Bio.), Professor, Head of the Laboratory
Research Laboratory of Immunohematology and Blood Group Genomics
191024
ulitsa 2-ya Sovetskaya 16
Saint Petersburg
Светлана Викторовна Гавровская, м. н. с.
научно-исследовательская лаборатория иммуногематологии и геномики групп крови
Санкт-Петербург
Svetlana V. Gavrovskaya, Junior Researcher
Research Laboratory of Immunohematology and Blood Group Genomics
Saint Petersburg
Елена Анатольевна Сысоева, м. н. с.
научно-исследовательская лаборатория иммуногематологии и геномики групп крови
Санкт-Петербург
Elena A. Sysoeva, Junior Researcher
Research Laboratory of Immunohematology and Blood Group Genomics
Saint Petersburg
Сергей Владимирович Сидоркевич, д. м. н, директор
Санкт-Петербург
Sergey V. Sidorkevich, Dr. Sci. (Med.), Director
Saint Petersburg
Актуальность: Тромбоцитопения (количество тромбоцитов < 150×109/л) встречается у 1–5 % новорожденных. Снижение показателя до 50×109/л ведет к развитию геморрагического синдрома. Одной из причин является неонатальная аллоиммунная тромбоцитопения (НАИТ), обусловленная несовместимостью матери и плода по антигенам системы HPA (Human Platelet Antigens), отсутствующим у матери и унаследованным ребенком от отца, что приводит к выработке у матери антител. Клинически значимыми являются анти-HPA1a, анти-HPA5b, анти-HPA3а и анти-HPA3b антитела, разрушающие тромбоциты плода/новорожденного, что приводит к развитию тяжелых осложнений. В 20 % случаев развиваются внутричерепные кровоизлияния, в 10 % случаев – пренатальная или постнатальная гибель. Грамотное проведение диагностики определяет успех терапевтических мероприятий, кардинально различающихся в зависимости от причины тромбоцитопении.
Цель: Установить аллоиммунную природу тромбоцитопении новорожденного и специфичность антител в крови матери.
Материалы и методы: Исследовали образцы крови родителей новорожденных с тромбоцитопенией, доставленные из учреждений здравоохранения г. Санкт-Петербурга (21 пара). Аллоантитела в плазме матерей определяли методом проточной цитометрии после инкубации с тромбоцитами отца и окрашивания моноклональными антителами Goat F(ab’)2 Anti-Human IgG-FITC и CD41-PE. Показатель аллосенсибилизации вычисляли как процент IgG-позитивных клеток к числу клеток, фиксирующих анти-CD41 антитела. При значении ≥ 15 % делали вывод о наличии в образце антитромбоцитарных аллоантител. Генетические исследования проводили с использованием молекулярной системы детекции на анализаторе FluoVista (Inno-Train, Германия) с помощью аллель-специфических праймеров. Аллели генов, кодирующих экспрессию антигенов HPA1, HPA2, HPA3, HPA4, HPA5, HPA6, HPA9, HPA15, определяли методом полимеразной цепной реакции в реальном времени с использованием набора реактивов HPA-FluoGene (Inno-Train, Германия). Геномную ДНК выделяли с помощью набора ДНК-сорб-В (AmpliSens, Россия).
Результаты: У 8 из 21 (38 %) матерей обнаружены антитела, направленные против тромбоцитов отца ребенка. При генотипировании в парах мать/отец выявлены несовместимые сочетания антигенов тромбоцитов: НРА1b/HPA1a у 9 пар (на тромбоцитах матери нет антигена НРА1a, на тромбоцитах отца присутствует), из них у 5 матерей (55 %) были обнаружены антитела, вероятной специфичности анти-НРА1a; несовместимость НРА1a/HPA1b обнаружена у 4-х пар, у 2 (50 %) матерей обнаружены антитела специфичности анти-НРА1b. Несовместимость НРА3a/HPA3b имели 4 пары, антитела (вероятно, анти-HPA3b) обнаружены у одной матери (25 %). Обнаружена несовместимость HPA2a/ HPA2b, HPA5a/ HPA5b, HPA15a/ HPA15b, HPA15b/HPA15a (по 1 случаю из 21 пары), антител у матерей не обнаружено. Вероятная специфичность антител распределилась следующим образом: анти-HPA1a – 62%, анти-HPA1в – 25 % и анти-HPA3a – 13 %.
Заключение: В 8 случаях из 21 подтверждена иммунная природа тромбоцитопении новорожденных, установлена вероятная специфичность аллоантител в крови матерей.
Background: Thrombocytopenia occurs in 1-5 % of newborns (platelet count < 150 × 109/L). Low platelet count of 50 × 109/L leads to the hemorrhagic syndrome, with one of its causes being neonatal alloimmune thrombocytopenia resulting from incompatibility between the mother and the fetus with human platelet antigens (HPA) inherited from the father and absent in the mother, which leads to the formation of maternal antibodies. Anti-HPA-1a, anti-HPA-5b, anti-HPA-3a, and anti-HPA-3b antibodies are clinically significant as they destroy fetal/neonatal platelets causing severe complications (intracranial hemorrhage in 20 % of cases and prenatal or postnatal death in 10 % of cases). Adequate diagnosis is a key to a successful treatment approach, which largely depends on the thrombocytopenia cause.
Objective: To determine the alloimmune nature of neonatal thrombocytopenia and the specificity of antibodies in the mother’s blood.
Materials and methods: We studied blood samples of parents (21 pairs) of newborns with thrombocytopenia in Saint Petersburg, Russian Federation. We used flow cytometry to determine alloantibodies in the maternal plasma after incubation with paternal platelets and staining with Goat F(ab’)2 Anti-Human IgG-FITC and CD41-PE monoclonal antibodies. Allosensitization index was calculated as the percentage of IgG-positive cells to the number of cells fixing anti-CD41 antibodies. At the value of ≥ 15 %, antiplatelet alloantibodies were considered present in a sample. We used a molecular detection system of the FluoVista analyzer (Inno-Train, Germany) for genetic testing with allele-specific primers. Alleles of genes encoding the expression of HPA-1, HPA-2, HPA-3, HPA-4, HPA-5, HPA-6, HPA-9, and HPA-15 antigens were determined by a real-time polymerase chain reaction using a set of HPA-FluoGene reagents (Inno-Train, Germany). Genomic DNA was isolated using the DNA-sorb-B set (AmpliSens, Russian Federation).
Results: We found that 8 of 21 (38 %) mothers had antibodies against paternal platelets. During genotyping in mother/father pairs, incompatible combinations of platelet antigens were revealed: HPA-1b/HPA-1a in 9 pairs (HPA-1a antigen absent on the maternal platelets and present on the paternal platelets), of which 5 mothers (55%) had antibodies with a probable specificity to anti-HPA-1a; HPA-1a/HPA-1b incompatibility in 4 pairs, with 2 (50 %) mothers having antibodies with an anti-HPA-1b specificity. HPA-3a/HPA-3b incompatibility was observed in 4 pairs, with antibodies (probably anti-HPA3b) in 1 mother (25%). HPA-2a/HPA-2b, HPA-5a/HPA-5b, HPA-15a/HPA-15b, HPA-15b/HPA-15a incompatibilities were detected (1 case each in 21 pairs), with no antibodies found in mothers. The probable specificity of the antibodies was distributed as follows: 62 % for anti-HPA-1a, 25% for anti-HPA-1b, and 13 % for anti-HPA-3a.
Conclusions: We confirmed the immune nature of neonatal thrombocytopenia and determined the probable specificity of maternal alloantibodies in 8 of 21 cases.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.