Диагностика аллоиммунной тромбоцитопении новорожденных: определение специфичности антитромбоцитарных аллоантител в плазме крови матерей с помощью молекулярно-генетического метода

   Актуальность: Тромбоцитопения (количество тромбоцитов < 150×109/л) встречается у 1–5 % новорожденных. Снижение показателя до 50×109/л ведет к развитию геморрагического синдрома. Одной из причин является неонатальная аллоиммунная тромбоцитопения (НАИТ), обусловленная несовместимостью матери и плода по антигенам системы HPA (Human Platelet Antigens), отсутствующим у матери и унаследованным ребенком от отца, что приводит к выработке у матери антител. Клинически значимыми являются анти-HPA1a, анти-HPA5b, анти-HPA3а и анти-HPA3b антитела, разрушающие тромбоциты плода/новорожденного, что приводит к развитию тяжелых осложнений. В 20 % случаев развиваются внутричерепные кровоизлияния, в 10 % случаев – пренатальная или постнатальная гибель. Грамотное проведение диагностики определяет успех терапевтических мероприятий, кардинально различающихся в зависимости от причины тромбоцитопении.

   Цель: Установить аллоиммунную природу тромбоцитопении новорожденного и специфичность антител в крови матери.

   Материалы и методы: Исследовали образцы крови родителей новорожденных с тромбоцитопенией, доставленные из учреждений здравоохранения г. Санкт-Петербурга (21 пара). Аллоантитела в плазме матерей определяли методом проточной цитометрии после инкубации с тромбоцитами отца и окрашивания моноклональными антителами Goat F(ab’)2 Anti-Human IgG-FITC и CD41-PE. Показатель аллосенсибилизации вычисляли как процент IgG-позитивных клеток к числу клеток, фиксирующих анти-CD41 антитела. При значении ≥ 15 % делали вывод о наличии в образце антитромбоцитарных аллоантител. Генетические исследования проводили с использованием молекулярной системы детекции на анализаторе FluoVista (Inno-Train, Германия) с помощью аллель-специфических праймеров. Аллели генов, кодирующих экспрессию антигенов HPA1, HPA2, HPA3, HPA4, HPA5, HPA6, HPA9, HPA15, определяли методом полимеразной цепной реакции в реальном времени с использованием набора реактивов HPA-FluoGene (Inno-Train, Германия). Геномную ДНК выделяли с помощью набора ДНК-сорб-В (AmpliSens, Россия).

   Результаты: У 8 из 21 (38 %) матерей обнаружены антитела, направленные против тромбоцитов отца ребенка. При генотипировании в парах мать/отец выявлены несовместимые сочетания антигенов тромбоцитов: НРА1b/HPA1a у 9 пар (на тромбоцитах матери нет антигена НРА1a, на тромбоцитах отца присутствует), из них у 5 матерей (55 %) были обнаружены антитела, вероятной специфичности анти-НРА1a; несовместимость НРА1a/HPA1b обнаружена у 4-х пар, у 2 (50 %) матерей обнаружены антитела специфичности анти-НРА1b. Несовместимость НРА3a/HPA3b имели 4 пары, антитела (вероятно, анти-HPA3b) обнаружены у одной матери (25 %). Обнаружена несовместимость HPA2a/ HPA2b, HPA5a/ HPA5b, HPA15a/ HPA15b, HPA15b/HPA15a (по 1 случаю из 21 пары), антител у матерей не обнаружено. Вероятная специфичность антител распределилась следующим образом: анти-HPA1a – 62%, анти-HPA1в – 25 % и анти-HPA3a – 13 %.

   Заключение: В 8 случаях из 21 подтверждена иммунная природа тромбоцитопении новорожденных, установлена вероятная специфичность аллоантител в крови матерей.

1. Pahal GS, Jauniaux E, Kinnon C, Thrasher AJ, Rodeck CH. Normal development of human fetal hematopoiesis between eight and seventeen weeks’ gestation. Am J Obstet Gynecol. 2000;183(4):1029–1034. PMID: 11035358. doi: 10.1067/mob.2000.106976

2. Husebekk A, Skoden B, Killie MK, et al. Fetal and neonatal alloimmune thrombocytopenia (FNAIT). ISBT Science Series. 2011;6(2):261–264. doi: 10.1111/j.1751-2824.2011.01498.x

3. Выхристюк Ю.В., Куликова О.В., Майорова О.А. Патология тромбоцитарного звена гемостаза у новорожденных (обзор литературы). Вопросы гематологии/онкологии и иммунопатологии в педиатрии. 2003;2(2):38–43.

4. Dahmane Ayadi I, Ben Hamida E, Youssef A, Sdiri Y, Marrakchi Z. Prevalence and outcomes of thrombocytopenia in a neonatal intensive care unit. Tunis Med. 2016;9(4):305–308. PMID: 27704515.

5. Масчан А.А., Румянцев А.Г. Иммунно-опосредованные тромбоцитопении новорожденных: дифференциальный диагноз и принципы терапии. Вопросы гематологии/онкологии и иммунопатологии в педиатрии. 2010;9(3):13–18.

6. Закиров И.И., Сафина А.И. Тромбоцитопении новорожденных. Вестник современной клинической медицины. 2013; 6(6):102–107.

7. Чижкова А.Н. Дифференциальная диагностика тромбоцитопений у новорожденных. Российский журнал детской гематологии и онкологии. 2015;2(4):104–107. doi: 10.17650/2311-1267-2015-2-4-104-107

8. Под ред. Н.Н. Володина. Неонатология: национальное руководство. ГЭОТАР-Медиа; 2009.

9. Sullivan MJ, Kuhlmann R, Peterson JA, Curtis BR. Severe neonatal alloimmune thrombocytopenia caused by maternal sensitization against a new low-frequency alloantigen (Domb ) located on platelet glycoprotein IIIa. Transfusion. 2017;57(7):1847–1848. PMID: 20518345. doi: 10.1111/trf.14160

10. Roberts IAG, Chakravorty S. Thrombocytopenia in the newborn. In: Michelson AD, ed. Platelets. 3^rd ed. Academic Press; 2013:929–951.

11. Бутина Е.В., Зайцева Г.А. Методы диагностики иммунной тромбоцитопении плода и новорожденного. Клиническая лабораторная диагностика. 2016;61(10):715–719.

12. Allen D, Ouwehand WH, de Haas M, Kekomaki R, Kaplan C, Metcalfe P. Interlaboratory variation in the detection of HPA-specific alloantibodies and in molecular HPA typing. Vox Sang. 2007;93(4):316–324. PMID: 180702276. doi: 10.1111/j.1423-0410.2007.00960.x

13. Минеева Н.В., Заварзина О.А., Сумская Г.Ф., Гавровская С.В. Выявление антитромбоцитарных антител у беременных и новорожденных. Medline.ru. Российский биомедицинский журнал. 2012;13:771–779.

14. Олс Р., Едер М. Гематология, иммунология и инфекционные болезни. Под ред Р. А. Полина; под ред. А. Г. Румянцева. Логосфера; 2013:22–35.

15. Curtis BR, McFarland JG. Human platelet antigens - 2013. Vox Sang. 2014;106(2):93–102. PMID: 24102564. doi: 10.1111/vox.12085

16. Хаспекова С.Г., Шустова О.Н., Головкина Л.Л., Мазуров А.В. Диагностические маркеры и предикторы неонатальной иммунной тромбоцитопении. Гематология и трансфузиология. 2019;64(2):198–210. doi: 10.35754/0234-5730-2019-64-2-198-210

17. Zdravic D, Yougbare I, Vadasz B, et al. Fetal and neonatal alloimmune thrombocytopenia. Semin Fetal Neonatal Med. 2016;21(1):19–27. PMID: 26810319. doi: 10.1016/j.siny.2015.12.004

18. Arneth B. Neonatal immune incompatibilities between newborn and mother. J Clin Med. 2020;9(5):1470. PMID: 32422924. PMCID: PMC7291300. doi: 10.3390/jcm9051470